Cutaneous leishmaniasis'li hastaların tanı ve takibinde real-time PCR kullanımı / The use of real time PCR in diagnosis and follow up of patients with cutaneous leishmaniasis

Abstract

Kutanöz Leishmaniasis'li Hastaların Tanı ve Takibinde Real Time PCR Kullanımı Ayşe Nuriye VARIŞLI Mikrobiyoloji, Yüksek Lisans Tezi Kutanöz leishmaniasis tanısında kullanılan geleneksel tanı metodları; direkt mikroskobi ve kültürdür. Bunlar genellikle zaman alıcı ve yorucudur, düşük duyarlılıktadır. Real- time kantitatif PCR tekniği parazitolojide son zamanlarda kullanıma girmiştir. Real- time PCR tekniği tamamen kantitatif sonuç verir, hızlı bir yöntemdir, amplifikasyon sonrası elektroforez yapılmasına ihtiyaç göstermez ve daha hassastır. Biz, kutanöz leishmanisis'li hastaların biyopsi örneklerinde leishmania parazitinin tesbiti için kantitatif bir test olan real- time PCR tekniğini kullandık. Bu çalışmanın amacı, kutanöz leishmaniasis'li hastaların tanısında real- time PCR'ın etkinliğini belirlemek ve konvansiyonel tanı metodlarıyla karşılaştırmak idi. Leishmaniasis için test edilen, hasta olduğu varsayılan kadın ve erkeklerden 50 ince iğne biyopsi örneği toplandı. Bu örnekler 3 gruba ayrıldı. lk gruptaki örnekler Giemsa ile boyandı. Diğer grup örnekler kültür için N. N. N besiyerine bırakıldı. Son gruptaki örnekler ise i- cycler sistemiyle real- time PCR `da çalışıldı. Klinik tanı altın standart olarak alındığında PCR`ın duyarlılığı % 92, kültürün duyarlılığı % 50, direkt mikroskobinin duyarlılığı ise % 40 olarak bulundu. Parazitemi çok geniş bir dağılım göstermekteydi (9 - 155,000 parazit/ ml, ortalama olarak 457 parazit/ ml ). Kutanöz leishmaniasis'in tanısında real- time PCR `ın kullanımı hassasiyet sağlar, tanıyı özgülleştirir ve hastanın takibinde kullanışlı bir metoddur. Bu sonuçlar, real- time PCR'ın, kutanöz leishmaniasis'li hastaların tanı ve takibinde bize büyük kolaylıklar sağlamakta olduğunu göstermiştir. Anahtar Kelimeler: Kutanöz leishmaniasis, Direkt Mikroskopi, Kültür, Real- time PCR, Tedavi The Use Of Real Time PCR n Diagnosis And Follow Up Of Patients With Cutaneous Leishmaniasis Ayşe Nuriye VARIŞLI Microbiology, Mastres Thesiss Conventional diagnostic methods in diagnosis of leishmaniasis are direct microscopy and culture. These are often time-consuming, difficult and low sensitive. Real-time quantitative polymerase chain reaction has recently been used to parasitology. This PCR techniques are truly quantitative, are quick to perform and require no manipulations post- amplification and more sensitive. We have used a real-time PCR quantitative test for the detection of leishmania parasite in biopsi samples of patients with cutaneous leishmaniasis. The aim of this study was to asses the efficacy of real- time PCR method and compared with conventional diagnostic methods in establishing the diagnosis of patients with cutaneous leishmaniasis. A total of 50 needle biopsy samples collected prospectively from both men and women were tested for leishmaniasis. These samples were divided into three groups. First group samples were stained with the Giemsa. Another group samples were given in medium of N.N.N for culture. Last groups samples were studied real time PCR with the i-cycler system. With clinical diagnosis as the gold standard, real- time PCR had a sensitivity of 92 % (46/50), 50 % (25/50) for culture and 40 % (20/50) for microscopy of direct. Parasitemia could vary by a wide range (9 to 155,000 parasites/ml, with a median of 457 parasites/ml). The use of real time PCR in diagnosis of cutaneous leishmaniasis would provide sensitive and specific diagnosis and could improve patient management. These results indicate that real time PCR will be a great help to us for diagnosis and follow-up of patients with cutaneous leishmaniasis. Key words: Cutaneous leishmaniasis, Direct Microscopy, Culture, Real- time PCR, Therapy.