Cyperus rotundus ekstresinin iskemi/reperfüzyon oluşturulmuş sıçanlarda gastral mukozal hasara karşı etkisi / Effect of cyperus rotundus extracts against gastric mucosal injury induced by ischaemia/reperfusion in rats

Abstract

Bu çalisma için denekler (Wistar-albino) Ankara Hifzisihha Serum Çiftligi' nden temin edildi. 30 adet denek her grupta n=6 olacak sekilde 5 esit gruba ayrildi. Deneyden 18 saat önce aç birakilan siçanlara su serbest birakildi. Bütün siçanlara Ketamin (35 mg/kg) ve Xylazine (5 mg/kg) anestezi (i.m.) uygulandi. Grup 1; sham kontrol grubu, Grup 2; kontrol iskemi- hasta grup, Grup 3; C. rotundus + Iskemi grubu olup (200 mg/kg) bitki ekstresi (Gum Arabica'da %10'luk süspansiyon içerisinde) orogastrik yolla verildi. Grup 4; C. rotundus + Iskemi/Reperfüzyon grubu ve Grup 5; Vitamin E + Iskemi grubu olarak adlandirildi. Olusturulan gruplarin içinde sham kontrol grubu hariç diger gruplarda iskemi gerçeklestirildi. Sham kontrol grubuna herhangi bir islem yapilmamis olup, sadece normal degerlerin saptanmasi amaçlandi. 2. grup olan kontrol iskemi grubu hasta grup olup yalnizca iskemi gerçeklestirildi. 3. ve 4. gruplara deneye baslamadan 10 dakika önce orogastrik olarak oral yolla (200 mg/kg) bitki ekstresi verildi. 5. gruba ise Iskemi uygulamasindan 10 dakika önce oral yolla (100 mg/kg) Vitamin E verildi. Yalnizca 4. grupta siçanlar iskemiden sonra 60 dakika boyunca kiskacin kaldirilmasi ile reperfüze edilerek I/R uygulamasi gerçeklestirildi. Deney sonunda öldürülen bütün siçanlarin izole edilen midelerinin yarisi biyokimyasal analizler (MDA ve GSH) için, diger yarisi da histopatolojik inceleme için kullanildi. Biyokimyasal analiz sonucunda GSH ölçümü yapilan kontrol iskemi grubunun (Grup 2) GSH degeri (125 nmol GSH/100 mg mide yas agirligi), sham kontrol grubunun (Grup 1) GSH degerinden (118 nmol GSH/100 mg mide yas agirligi) düsük oldugu görülmüstür (Sekil 4.1.). Vitamin E grubunda GSH degeri (114 nmol GSH/100 mg mide yas agirligi) ile kontrol Iskemi gurubu (125 nmol GSH/100 mg mide yas agirligi) karislastiginda anlamli farklilik P< 0.05 görülmüstür. Biyokimyasal analiz sonucunda MDA ölçümü yapilan Sham kontrol (Grup 1) ile Vitamin E + Iskemi (Grup 5) gruplari arasinda anlamli fark görülmüstür (p<0.05). Kontrol Iskemi (Grup 2) ile C. rotundus + I/R (Grup 4) gruplari arasinda anlamli fark görülmüstür ( p<0.05). Diger gruplar arasinda yapilan karsilastirmalarda anlamli fark gözlenmemistir (Sekil4.2.). Nicel olarak histopatolojik degerlendirme skorlama metodu kullanilarak yapildi. Mide dokularinin histopatolojik incelenmesi, dorsal ve ventral yüzeylerin boyuna kesilerek glandular bölgeden çikarilmasiyla yapildi. Midelerin yarisinda preparat hazirlamak için parafin yöntemi kullanildi. Degerlendirilme, zarar gören ve apse olusan bölgelerde skorlama metodu kullanilarak Cyperus rotundus ve Vitamin E kriterleri tespitiyle yapildi. Sonuç olarak midede Iskemi ve Iskemi/Reperfüzyon modelleri uygulanmasina bagli olarak mukozal bütünlügün bozuldugu görülmüstür. Mide dokusunda iskemi, hücreleri hasara ugratip, hücre ölümüne yol açabilir. Bu nedenle iskemi durumunda dokularda oksijenizasyonun tekrar saglanmasi hasarli bölgede reaktif oksijen türlerinin artmasina ve geçici olarak hasarin agirlasmasina sebep olmaktadir. Serbest radikallerin birikimi ile lipit peroksidasyon ürünü olan MDA konsantrasyonu artmakta oldugu ve buna bagli olarak bir antioksidan olan GSH konsantrasyonunun azaldigi görülmüstür. Kullanilan antioksidanlarin ise peroksidasyon ürünü olan MDA olusumunu engelledigi ve antioksidan olan GSH miktarini korudugu tespit edilmistir. In this study albino Wistar rats (weight 200±20 gr) were used. The animals obtained from (Ankara Hifzisihha Serum Çiftligi) Ankara. 30 rats were divided into equal 5 groups each containing 6 animals. All animal were fasted for 18 hours before the experiment, water free add libitum. All rats were anesthetizing (i.m.) using Ketamin (35mg/kg) and Xylazine (5mg/kg). Group 1 was Sham group (control not treated with vehicle), group 2 was Ischemia group for 60 minutes and served as control group. Group 3 (Ischemia group) was treated with 200 mg/kg body weight C. rotundus before 10 minutes of Ischemia (suspended into %10 Gum Arabica). Group 4 Ischemia /Reperfusion treated with 200 mg/kg body weight C. rotundus before 10 minutes of Ischemia for 60 minutes followed reperfusion for 60 minutes. Group 5 was treated with Vitamin E 100 mg/kg body weight before 10 minutes of Ischemia for 60 minutes. At the end of the experiment all rats were killed by dislocation, the stomach removed and divided into 2 parts, one part for biochemical analysis (for MDA and GSH), other for histopathological examination. The biochemical analysis of GSH sho wed when we compared GSH value of Vitamin E (114 nmol GSH/100 mg wet weight) and control group (125 nmol GSH/100 mg wet weight) there are significant P<0.05 had been see p>0.05 between all group in experiment (Fig. 4.1.) The biochemical analysis of MDA shows, group 2 MDA value is (3.58 nmol MDA/100 mg) of stomach wet weight. In this group when compared with group 3 and group 4 shows no significant p>0.05 value but significant p<0.05 when compared with group 4 (Fig. 4.2.). Quantitative histopathological assessment was performed using techniques of the score method. Briefly the stomach was divided along a line running across the upper part of the glandular mucosa and the cut edge derived from the ventral surface of the stomach was embedded in paraffin using standard technique. The criteria of damage were absence of cells or gross disruption of cells in groups treated with Cyperus rotundus and Vitamin E. As a result the stomach Ischemia and Ischemia/Reperfusion models the mucosal disrupter was shown in the experimental groups. This is the cause of increase of peroxidations substrates MDA and decreased the level of GSH which is an antioxidant. Both Ischemia and Reperfusion appear to contribute to the extent of farther expression of Ischemia or Reperfusion injury not prevented by the treatments designed to block reactive oxygen metabolites.