Deneysel iskemi-reperfüzyon oluşturulmuş sıçan retinasında apoptozisin incelenmesi / The investigations of apoptosis in ischemia-reperfusion induced rat retina

Abstract

Bu çalışma, çeşitli antioksidanların, sıçan retinasında iskemi-reperfüzyon (İ-R) sırasında oluşan serbest oksijen radikallerine karşı muhtemel rolünü göstermektedir. Hayvanlar rast gele seçilerek sekiz gruba ayrıldı. Bunlar 1. grup (kontrol), 2. grup (İ-R), 3. grup (İ-R + Trigonella foenum-graecum), 4. grup ((İ-R+ Cyperus rotundus ), 5. grup (Thymus longicaulis), 6. grup (Fumaria asepala Boiss.), 7. grup (Lutein) ve 8. grup (Salisilaldimin) olarak adlandırıldı. Deneyde sıçanların sağ gözleri iskemi-reperfüzyon için kullanıldı. 3-8. gruplara iskemi başlamadan 6 saat öncesinden ve reperfüzyonda altışar saat aralıklarla Trigonella, Cyperus, Thymus, Fumaria ekstraktı, lutein ve salisilaldimin verildi. 24 saatlik reperfüzyondan sonra hayvanlar kesildi. Daha sonra retinalar, malondialdehit (MDA) ve glutatyon (GSH) ölçümü için izole edildi. Bu deney sonucunda, tüm grupların lipid peroksidasyonunu, iskemi grubuna göre koruduğu saptanırken, salisilaldimin (2.92 nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı) grubunun MDA değeri kontrol (2.82 nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı) grubuna en yakın değere sahip olduğu görüldü. Buna göre, salisilaldiminin (2.92 nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı) Luteinden (3.55 nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı), Luteinin, Fumaria' dan (4.95 nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı), Fumaria'nın Cyperus'tan (5.59 nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı), Cyperus'un Thymus'tan (9.16nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı), Thymus'un Trigonella'dan (10.46 nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı) daha iyi koruma sağladığı görülmüştür. GSH miktarları değerlendirildiğinde kontrol grubuna (2.3 nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı) en yakın değerin Fumaria grubunda (2.2 nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı) olduğu görülmüştür. Buna göre Fumaria grubundaki GSH miktarı (2.2 nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı) salisilaldiminden (2.1 nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı), salisilaldiminin Trigonella ve Cyperus'tan'dan (1.9 nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı), Trigonella ve Cyperus'un Luteinden (1.8 nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı) daha yüksek olarak bulunmuştur. Sonuç olarak kullanılan antioksidanların peroksidasyon ürünü olan MDA oluşumunu engellediği ve bir antioksidan olan GSH miktarını koruduğu tespit edilmiştir. Buna ilave olarak iskemi-reperfüzyon sonucunda oluşan apoptozisden birinci derecede sorumlu kaspaz- 3 proteini SDS-PAGE ve immünoblot teknikleri ile incelenmiştir. İmmunoblot sonuçları Fluor-S-Multi-Imager ile taranarak gruplar arasındaki farklılıklar tespit edilmiştir. Elde edilen bu sonuçlara göre, kullanılan antioksidanların özellikle de salisilaldiminin gözde oluşan I/R hasarlarına karşı klinik amaçlı kullanılabileceği kanaati ortaya çıkmaktadır. ANAHTAR KELİMELER : İskemi-reperfüzyon, retina, MDA, GSH, apoptozis, kaspaz 3 This study shows the possible role of various antioxidants on free oxygen radicals which formed during ischemia-reperfusion (I-R) in rat retina. The animals, randomly selected, were divided into eight groups. These were named as group 1 (control), group 2 (I-R), group 3 (I-R+ Trigonella), group 4 (I-R+Cyperus), group 5 (I- R+Thymus), group 6 (I-R+ Fumaria), group 7 (I-R + Lutein), group 8 (I-R + Salisilaldimin). In the experiment, right eyes of rats were used for ischemia-reperfusion. Groups 3-8 received, Trigonella, Cyperus, Thymus, Fumaria extract, lutein and salisilaldimin before 6 hours of ischemia and after 6 hours of reperfusion respectively. The animals were sacrificed after 24 hours of reperfusion. Then, retina were isolated and processed for the quantification of malondialdehyde (MDA) and glutathione (GSH) levels. At the end of this experiment, all groups determined significiant protection aganist formation of MDA when compared to I-R group while MDA level of salisilaldimin (2.92 nmol/100 mg retina tissue wet weight) group was observed as it had the closest level to the control group. According to this, lutein (3.55 nmol/100 mg retina tissue wet weight) provides more protection than Fumaria (4.95 nmol/100 mg retina tissue wet weight), Cyperus (5.59 nmol/100 mg retina tissue wet weight), Thymus (9.16 nmol/100 mg retina tissue wet weight) Trigonella (10.46 nmol/100 mg retina tissue wet weight).When quantity of GSH was evaluated, it was observed that lutein group (2.3 nmol/100 mg retina tissue wet weight) had the closest level to the control group. According to this result, the quantity of GSH in group Fumaria was found higher than salisilaldimin (2.1nmol/100 mg), Trigonella and Cyperus (1.9 nmol/100 mg retina tissue wet weight), Lutein (1.8 nmol/100 mg retina tissue wet weight) Thymus (1.8 nmol/100 mg retina tissue wet weight). As result, antioxidants which used in this experiment was found to prevent formation of peroxidation substrat MDA and protect quantity of a antioxidant GSH. In addition, the level of caspase -3 which is a marker of apoptotic damage occured during ischemia- reperfusion was determined by using SDS-PAGE and immunoblot assay. The results of immunoblot assay were scanned to see the differences between groups by Fluor-S-Multi-Imager (Bio-Rad). According to these results, all tested antioxidants particularly lutein may use in patients with different types of ocular I/R injuries.