Escherichia coli'de rekombinant ekspanzin (protein) üretimi / Recombinant expansin (protein) production in Escherichia coli

Abstract

Ekspanzin proteinleri bitki hücre duvarında bulunan bir protein ailesidir. Ekspanzin proteinleri in vitro ortamda hücre duvarını parçalama yeteneğine sahip yegane proteinler olarak literatürde yer almaktadırlar. Bitki hücre gelişimi, meyve yumuşaması, kök kılların çıkması, stigma ve polen tüpü gelişimi ve hücre duvarı parçalanmasındaki gelişimsel süreçlerde önemli bir role sahiptirler. Sürekli kültür, rekombinant protein ekspresyonunda hücreleri yetiştirmek için en yaygın yöntemdir. Çalışmada rekombinant Ekspanzin proteini üretimi için kültür olarak E.coli' nin K12 suşu kullanılmıştır. LeExp 1 geninin ilgili vektöre klonlanabilmesi için ilk olarak LeExp1 geni PZR yöntemiyle çoğaltılmıştır. Klonlanan LeExp 1 geni uygun bir kit vasıtasıyla ekspresyon vektörüne aktarılmıştır. Vektör E. coli sıvı kültürün içerisinde bakterilere transforme edilmiştir. Böylece E. coli bakterisine rekombinant protein üretimi özelliği kazandırılmıştır. Elde edilen proteinin uygun protein olup olmadığı biyokimyasal ve moleküler analizlerle tespit edilmiştir. Expance proteins are a family of proteins found in plant cell walls. Expansion protein in vitro have the ability to destroy the cell walls are located only in the literature as proteins. Plant cell development, fruit softening, the emergence of the hair follicle, the stigma and pollen tube growth and cell wall fragmentation have an important role in the developmental process. Continuous culture is the most common method for growing cells in recombinant protein expression. E. coli K12 strains were used as culture for production of recombinant Expansin protein LeExp1 gene can be cloned into the vector was amplified by PCR method regarding the first. Leexp1 cloned gene was transferred into expression vector by a suitable kit. Vector was transformed into E. coli bacteria in the liquid culture. Thus the production of recombinant protein in the E. coli bacterium characterized in the literature. The resulting protein was detected by biochemical and molecular analyzes whether it is appropriate protein.