Bazı bitki ekstrelerinin immobilize stres oluşturulan sıçanlar üzerindeki rolü / The effect of some plants extracts in immobilized stress rats

Abstract

Strese bağlı birçok hastalık üzerinde etkili olan antistres ajanlar üzerindeki araştırmalar büyük önem kazanmaktadır. Çalışmamızda erkek wistar albino (250-350 g) ratlar kullanarak tekrarlanan immobilize stresin biyolojik etkileri ile Passiflora incarnata, Melissa officinalis, Hypericum perforatum ve Valeriana officinalis bitki ekstrelerinin anti stres ve antioksidan etkinliğini test ettik. Sıçanlar her grupta altı rat olmak üzere altı gruba ayrıldı; kontrol grubu (K), immobilize stres uygulanmış grup (S), immobilize stres uygulanıp H. perforatum ekstresi verilmiş gurup (S/H), M. officinalis (S/M), V.officinalis (S/V), P. incarnata (S/P). Sıçanlara ardışık yedi gün boyunca günde 120 dakika subakut immobilize stres uygulandı. Bitki ekstresi verilen guruplara immobilize stres uygulanmadan, bir saat önce bitki ekstresi verildikten sonra stres uygulandı. Sıçanlar stres uygulamasından hemen sonra eter ile anestezi edilerek sakrifiye edildi. Abdomen ve toraks kesilerek açıldıktan sonra kalpten kan alındı. Alınan kanın bir kısmı 3000 rpm de15 dakika santrifüj edilerek serumu ayrıştırıldı. Serum; glikoz, trigliserit, kolesterol, alanin amino transferaz (ALT), aspartat aminotransferaz (AST), kreatin kinaz (CK), amilaz, gamma glutamil transferaz (GGT), alkalin fosfataz (ALP), laktat dehidrogenez (LDH), kolesterol, düşük dansiteli lipoprotein (LDL), yüksek dansiteli lipoprotein (HDL), ürik asit, demir, magnezyum, bilirubin, albümin, total protein, kan üre azotu (BUN) parametreleri otoanalizör ile (Roche, Cobas Integra 400 plus) ve serum hormon parametreleri; kortizol, total troid T4, serbest T3 ve serbest T4 kitler kullanılarak otoanalizör (Roche, Immulite 2000) ile ölçüldü. Total kan kullanılarak eritrosit, lökosit, monosit, granülosit ve lenfosit sayıları hemogram cihazı (Abacus Junior) ile ölçüldü. Serum, beyin ve mide dokuları alınarak malondialdehit (MDA), redükte glutatyon (GSH), ölçüldü. Eritrosit, beyin ve mide dokularının süpernatantı alınarak glutatyon S-transferaz (GST) ve katalaz (CAT) analizleri yapıldı. Hayvanların ağırlık değişimi, su ve yem tüketimleri deney süresinden hayvanların kesimine kadar her gün gözlemlenerek kaydedildi. Çıkan sonuçlar istatistiksel olarak Mann-Whitney testine göre yorumlandı. Çalışmamız sonucunda; kortizol miktarı tüm stres guruplarında artış gösterdi. MDA miktarı stres grubuna ait serum, beyin ve mide dokularında artış gösterirken, S/M, S/H, S/V ve S/P guruplarında azaldı. GSH stres grubuna ait serum, beyin ve mide dokularında azalış gösterirken, S/M, S/H, S/V ve S/P guruplarında artış gösterdi. Katalaz ve GST seviyesi stres grubuna ait eritrosit, beyin ve mide dokularında azalış gösterirken, S/M, S/H, S/V ve S/P guruplarında artış gösterdi. İmmobilize stres sonucu kontrol ile karşılaştırıldığında stres grubunda kilo kaybı, serum glikoz ve kortisol, total T4, serbest T3, T4 miktarında istatiksel olarak belirgin bir artış gözlenirken, AST, ALT, ALP, CK, amilaz, LDH, trigliserit, total protein, BUN, kreatinin, kolestrol, LDL ve HDL azalış gözlendi. Ayrıca eritrosit, lökosit, monosit ve lenfosit sayısında belirgin azalma olduğu saptandı. Çalışmamız sonucunda H. perforatum, M. officinalis, P. incarnata ve V. officinalis bitki ekstrelerinin antistres (adaptogen) ve antioksidan aktiviteye sahip olduğu sonucuna varıldı. As stress is linked to many diseases, research on an effective anti stress agent (adaptogen) from plants has gained importance. In the present study, we have examined the biological effects of repeated immobilization stress and tested the hypothesis that extracts Passiflora incarnata, Melissa officinalis, Hypericum perforatum and Valeriana officinalis are anti-stress and antioxidants effect, using male wistar albino rats (250-350 g). Rats (N=6) were divided into the following six groups: control (C), immobilization stress (S), immobilization stress administration of H. perforatum (S/H), M officinalis (S/M), V. officinalis (S/V) and P. incarnata (S/P). Rats exposed to immobilization stress for 120 min for seven consecutive days in subacute stress, were intragastric with extracts for seven days, one hour prior to each exposure of stress. The rats were sacrificed immediately after stress under ether anaesthesia, the abdomen and thorax were cut open, and blood was collected through cardiac puncture. The blood was centrifuged at 3000 rpm-15 min the serum was separated. The serum was used to estimate glucose, triglycerides, cholesterol, alanin aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), creatine kinase (CK), gamma glutamyl transferase (GGT), alkaline phosphatase (ALP), lactate dehydrogenase (LDH), amylase, cholesterol, low density lipoprotein (LDL), high density lipoprotein (HDL), uric acid, ferritin, magnesium, bilirubin, , albumin, total protein, blood urea nitrogen (BUN ) using autoanalyzer (Roche, Cobas Integra 400 plus) and serum hormones parameters as cortisol, total thyroid T4, free T3 and free T4 using autoanalyzer (Roche, Immulite 2000) with their respective kits. Total blood was used to estimate erythrocyte, white blood cell, monocytes, granulocytes and lymphocytes number using autoanalyzer (Abacus Junior). Serum, brain and stomach were used for malondialdehyde (MDA), reduced glutathione (GSH). Erythrocyte, brain and stomach used for glutathione S-transferase (GST) and catalase (CAT) analyses. The body weight, water and fed consumption of the animals was determined at the beginning of the experiment, every day during the experiment, and 24 hour prior to decapitation The results that came out were statistically interpreted according to Mann-Whitney test. As a result of our study, Plasma cortisol levels were increased in all stress groups. MDA levels were increased in serum, brain and stomach in stress group, but MDA levels decreased in the S/M, S/H, S/V and S/P groups. GSH levels were decreased serum, brain and stomach in stress groups but increased in the S/M, S/H, S/V and S/P groups. Catalase and GST activities were decreased in serum, brain and stomach in stress group but increased in the S/M, S/H, S/V and S/P groups. Results obtained showed that repeated immobilization stress resulted in significant inhibition in body weight gain, a significant increase in serum glucose, cortisol, total T3, free T3, T4 and decreased AST, ALT, ALP, CK, amylase, LDH, triglyceride, total protein, BUN, creatinin, cholestreol, LDL and HDL levels as compared with control groups. We observed a significant decrease in erythrocyte, white blood cell, monocytes and lymphocytes number in stress groups compared with control groups. On the basis of our result, it is concluded that the standardized extract of H. perforatum L., M. officinalis L., P. Incarnate L. and V. officinalis L. possesses a potent adaptogenic and antioxidants activity.