Corynebacterium pseudotuberculosis’e KARŞI GELİŞTİRİLECEK AŞILARDA BAKTERİN VE/VEYA TOKSOİD FORMULASYONLARININ KARŞILAŞTIRILMASI

Abstract

Bu çalışmada Corynebacterium pseudotuberculosis’e karşı geliştirilecek aşılarda Bakterin ve/veya Toksoid formulasyonlarının karşılaştırılıp, hangisinin daha etkin koruma sağlayacağı test edildi. Çalışmada 2022 yılında 20 adet küçükbaş (koyun ve keçi) hayvandan saha ve kesimhaneden alınan apse içeriklerinden klasik tiplendirme ve moleküler yöntemlerle C. pseudotuberculosis izolasyonu ve identifikasyonu yapılıp, standart suş ile karşılaştırıldı. Kullanılacak izolat ve çelınç suşu belirlendikten sonra deney hayvanlarına enjeksiyonlar yapılıp, Minimum Letal Doz belirlenip hem deney hayvanlarında hem de hedef hayvanda (koyun) çelınç çalışmaları yapıldı. Çelınç sonucunda koruma dozları belirlenip farklı formulasyonlar hazırlandı. Bu formulasyonlarla deney hayvanlarında ve hedef hayvanda hiperimmunizasyon programına uygun şekilde immunizasyon yapılıp, kan serumları alındı. İnaktif edilen ürünün bekletildikten sonra kullanılması için formulasyonunu yapmak amacıyla Antijen Enzim Linked İmmunosorbent Assay (ELISA), aşılama sonrasında da hayvanlarda koruma sağlayıp sağlamadığını anlamak amacıyla Antikor ELISA çalışmaları yapıldı. Bu çalışmada izole edilen 20 adet numuneden 8 adet numunenin C. pseudotuberculosis olduğu klasik tiplendirme, moleküler yöntemlerle identifiye edildi. 8 adet izolata yapılan hemolitik unit testi sonucunda en yüksek titreye sahip Şanlıurfa 2 suşu izolat olarak belirlendi Bu suş, filogenetik tür tayini için numune olarak gönderildi ve % 99.52 oranında C.pseudotuberculosis olduğu doğrulandı. MLD çalışmalarında fare, tavşan ve kobaylara Bakteri, Bakteri + Toksin, Toksin formulasyonları enjekte edilerek koruma dozu belirlendi, koruma dozunun 10 MLD dozu çelınç dozu olarak uygulandı. Farelerde koruma dozu en yüksek Bakteri + Toksin formulasyonunda 5 x 104.83 MLD50/ml, kobaylarda koruma dozu en yüksek Bakteri + Toksin formulasyonunda 5x 103.5 MLD50/ml, tavşanlarda koruma dozu en yüksek Bakteri + Toksin formulasyonunda 5 x 103.83 MLD50/ml olarak bulundu. Çelınç çalışmalarında her bir deney hayvanı için 10 MLD50 kullanıldı. Her bir hayvan için 10-7’den 10-10 ‘a kadar Bakteri, Bakteri + Toksin, Toksin formulasyonları hazırlanıp fare, kobay ve tavşanlara uygulandı. En yüksek koruma Bakteri + Toksin formulasyonunda bulunmuş olup, farelerde bu değer 1 x 109,1, kobaylarda ve tavşanlarda 1 x 108.83 bulundu. Antijen ELISA sonucunda da en yüksek antijen miktarına sahip olan Bakteri + Toksin kültür formulasyonunun yeni üretilen antijende olduğu görüldü. Bu antijen standart antijen olarak belirlenmiştir. 2 farklı seri daha antijen üretilerek standart antijen ile karşılaştırılıp, serilerin konsantre veya dilüe edileceğine karar verildi. Hedef hayvanlarda çelınç çalışmaları Bakteri + Toksin formulasyonu (1 x 109.1) ile yapıldı. Çelınç dozu olarak 1 x 107 CFU/ml eprüvasyon yapıldı. Eprüvasyon sonucunda 0. Gün, 14. Gün ve 28. Gün 5 adet koyunun kanları alınarak antikor ELISA yapıldı. Bakteri Kaplamada 0. gün hiç antikor olmadığı, minimum antikor 14. günde alındı ve 1/64’tür. Toksin Kaplamada ise minimum antikor yine 14. günde alınmış olup, 1/128’dir. Sonuç olarak hayvanlarda Bakteri + Toksin kültürü formulasyonunun koruma sağladığı, antikor oluşturduğu görüldü.