Diyarbakır ilinde biber üretim alanlarında bulunanfitoplazmaların moleküler yöntemlerle saptanması / Detection of phytoplasmas by molecular methods in pepperproduction areas in di̇yarbakir province

Abstract

Diyarbakır ili Çınar, Bismil ve Sur ilçelerinde biber yetiştirilen alanlarda bitkilerin yapraklarında sararma, küçük yaprak oluşumu, bodurlaşma ve meyvede şekil bozuklukları biçiminde fitoplazma kaynaklı hastalık simptomları gözlenmiştir. Bu tür simptomlara sebep olan etmenin varlığını saptamak amacıyla çalışmalar yürütülmüştür. Biber yetiştirilen alanlarda hastalık simptomu gösteren ve göstermeyen bitkilerden örnekler alınmıştır. Toplanan örneklerin yaprak orta damarlarından CTAB metoduna dayalı olarak total DNA izolasyonu yapılmıştır. Örneklerdeki fitoplazma varlığı P1/P7 ve R16F2n/R2 fitoplazma üniversal primerleriyle nested PCR vasıtasıyla testlenmiştir. Nested PCR sonucunda yalnızca simptomatik belirti gösteren biber bitkilerinin yapraklarından elde edilen DNA'larda beklenen düzeyde bant (1250 bp) gözlenmiştir. Nested PCR ürünleri EcoRI restriksiyon enzimiyle RFLP yapıldığında etmenin fitoplazma olduğunu kanıtlayan 750 ve 500 bp bantlar gözlenmiştir. Bu çalışma ile Diyarbakır ilinde biber bitkilerinde fitoplazma enfeksiyonu ilk kez saptanmıştır. In Çınar, Bismil and Sur districts of Diyarbakır province, the symptoms caused by phytoplasmas of pepper cultivation have been observed with yellowing, small leaf formation, stunted and fruit shaped leaves symptoms. Studies have been conducted to determine the presence of the causative agent. In the areas where pepper was grown, samples were collected from plants with and without disease symptoms. Total DNA isolation was performed based on CTAB method from the leaf midrib of the collected samples. The presence of phytoplasma in the samples was tested by nested PCR with universal primers of phytoplasma P1/P7 and R16F2n/R2. Nested PCR results showed only the expected level of band (1250 bp) in the DNA obtained from the leaves of symptomatic pepper plants. In the RFLP process, Nested PCR products were digested with EcoRI restriction enzyme and 750 and 500 bp bands were observed to prove that the causative agent was phytoplasma. In this study, phytoplasma infection was found for the first time in pepper plants in Diyarbakır province.