Prostat kanseri hücre modelinde çift zincir DNA hasarına karşı gelişen cevap ve buna bağlı apoptotik uyarıda HN1'in etkilerinin belirlenmesi / Determination of the effects of HN1 on response to the DNA damage and induction of apoptosis in prostate cancer cells

Abstract

Bu tez çalışmasında, prostat kanseri hücreleri model alınarak HN1 geninin kodladığı proteinin çift zincir DNA hasarına karşı gelişen cevap ve buna bağlı oluşan apoptotik uyarıdaki etkileri hücre ve moleküler biyoloji yöntemleri kullanılarak araştırılmıştır.Bu tez çalışması HN1'in çift zincir DNA hasarı belirteci olan pH2AX (S139) fosforilasyonuna olan etkileri, çift zincir DNA hasarının onarımında görev alan ATM (S1981) fosforilasyonu üzerindeki etkileri ve DNA hasarı bağlı olarak uyarılan apoptoz mekanizmasını kontrol eden aktif kaspaz-3, kaspaz-8, kaspaz-9 ve PARP proteinlerine olan etkileri bölümlerinden meydana gelmektedir. Yapılan çalışmada ilk olarak kanser tedavisinde yaygın olarak kullanılan DNA hasarı ajanı olan doksorubisin ve kamptotesinin DNA hasarı yaratan en iyi dozu araştırılmıştır. Optimum doz belirlendikten sonra HN1 seviyesel değişiminin DNA hasarı ve apoptoz üzerindeki etkileri araştırılmıştır. Bunun yanı sıra HN1'in etki gösterdiği bir molekül olan ve DNA hasarı ile seviyesi artığı düşünülen siklinB1'in seviyesel değişiminin DNA hasarı karşı gelişen cevap ve buna bağlı oluşan apoptotik uyarıdaki rolü araştırılmıştır. Elde edilen tüm verilere bakıldığında prostat kanseri'nin androjen bağımlı modeli olan LNCaP hücreleri ve androjen bağımsız modeli olan PC-3 hücrelerinde HN1'in ektopik ekspresyonun DNA hasarına karşı oluşan cevap ve buna bağlı oluşan apoptotik uyarı belirgin bir şekilde inhibe ettiği görülmüştür. In the study, the effects of HN1 protein on the response to DNA double-strand breaks and coressponding apoptotic stimulation have been studied on prostate cancer cells by using cell and moleculer biology method. In this work, the effects of HN1 protein on pH2AX (S139) foci formation and phosphorylation which is an indicatör of DNA double strand breaks and on pATM which plays a role in DNA repair and on caspase-3, caspase-8, caspase-9, PARP which controls apoptosis mechanisim induced by DNA damage have been determined on PC-3, DU-145 and LNCaP cells. Firstly, the effect of DNA damage agents, camptothecin and doxorubicin which are used in cancer treatment on dose-dependent DNA damage and on cell poliferation. Optimum dose determined and the effect of the chance in HN1 level on the DNA damage and apoptosis, have been designeted. Additionally the role of level change of cyclin-B1 which is a target molecule of HN1 in response to DNA damage and coressponding apoptotic induction. The data showed that the chance in HN1 level has on effect on DNA damage response and corresponding apoptotic induction for LNCaP and PC-3 cells while it has on significant effect on more agressive prostate cancer cells DU-145.